質粒DNA純化步驟，您還不知道嗎

更新時間：2020-12-01

瀏覽次數：1253

　　質粒DNA純化步驟，您還不知道嗎

　　DNA純化和提取是法醫DNA物證鑒定的關鍵技術之一。質粒是一種小環DNA。在基因工程中，質粒常被用作載體，將靶基因轉移到受體細胞中。雖然近年來發展了許多更*的基因轉移載體（如慢病毒載體、腺病毒載體、AAV載體等），但質粒載體由于其制備簡單、在各種細胞中的高效性，仍被大多數實驗室所使用。

　　大量提取的質粒DNA需要進一步純化，常用柱層析法和氯化銫梯度離心法。所有的純化方法通常都使用兩種性質，即相對較小的質粒DNA和共價閉環。例如，用氯化銫進行質粒和染色體DNA的梯度平衡離心，取決于溴化乙錠與線性和閉環DNA分子之間的結合量。

　　質粒DNA純化步驟如下：

　　1、用無菌牙簽選擇平板上的單個菌落，接種于含有相應抗生素的3ml-LB培養基中，在37℃下于220rpm振動臺上培養過夜。

　　2、將1.5mL過夜培養的菌液轉移至Eppendorf離心管內，12000rpm離心30秒，棄上清。

　　3、加入100ul預冷的溶液Ⅰ，充分振蕩以懸浮沉淀，冰浴5分鐘。

　　4、加入200ul新鮮配制的溶液Ⅱ，輕輕顛倒5次混勻，使溶液澄清，冰浴放置5分鐘。

　　5、加入150ul預冷的溶液III，輕微振蕩均勻，冰浴5分鐘。

　　6、12000rpm離心10分鐘，轉移上清至另一個滅菌Eppendorf管中。

　　7、加入等體積錄仿：異戊醇（體積比24:1），混勻，以12000rpm離心10分鐘，取上層水相至另一個滅菌的Eppendorf試管中。注意，不采用低相溶液。

　　8、加入兩倍體積的冰乙醇，混勻，在-20℃沉淀15分鐘，以12000rpm離心10分鐘收集沉淀。

　　9、加70%乙醇1ml洗滌一次，12000rpm離心10分鐘，棄去，室溫干燥，加50ul Te溶解核酸，備用。

　　好了，以上便是關于質粒DNA純化的相關內容介紹了。